泛素化结果图（5）-E3泛素连接酶能泛素化底物蛋白_环球简讯

来源：个人图书馆-读博可以毕业哒时间：2023-07-01 11:16:41

【资料图】

泛素化结果图系列文档

泛素化结果图（1） -底物蛋白的降解

泛素化结果图（2）-E3泛素连接酶和底物蛋白的相互作用

泛素化结果图（3）-E3泛素连接酶和底物蛋白不同结构域的相互作用

泛素化结果图（4）-E3泛素连接酶泛素化底物蛋白

通过过表达（图25）或敲低（图26）E3泛素连接酶的方式检测底物蛋白质泛素化水平的改变。

图25 过表达E3泛素连接酶24-48小时后，裂解细胞，用Flag抗体IP底物蛋白质，用相应抗体检测相应蛋白质

图26 敲低E3泛素连接酶24-48小时后，裂解细胞，用Flag抗体IP底物蛋白质，用相应抗体检测相应蛋白质

体外泛素化实验

体外泛素化能够排除体内复杂的环境，让E3泛素连接酶直接与底物蛋白质作用，使E3泛素连接酶泛素化底物蛋白质更有说服力。体外UB, E1, E2, ATP以及buffer均有商业化试剂盒。只需纯化E3泛素连接酶和底物蛋白质进行体外泛素反应，检测底物蛋白质的泛素化。

图27 体外泛素化实验

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